Inventato da Fields and Song nel 1989, lo screening in doppio ibrido in lievito costituisce tutt’ oggi il metodo di screening più rapido, semplice ed utilizzato per l’ identificazione di interazioni proteina-proteina. Il metodo si basa sulla modularità del fattore di trascrizione Gal4 che, come tutti i fattori di trascrizione, può essere diviso in due componenti: un dominio di legame al DNA (BD: binding domain) e l'altro di attivazione della trascrizione (AD: activation domain).
Per identificare nuovi interattori di una proteina di interesse A, il cDNA del binding domain di Gal4 viene fuso al cDNA della proteina A, e il cDNA del dominio attivatore di Gal4 viene fuso ad una libreria di cDNA (B). Le due proteine chimere sono co-espresse in un ceppo di lievito recante uno o più geni reporter. Se A ed B interagiscono si ha la ricostituzione funzionale dell’attivatore trascrizionale che attiva l’espressione dei geni reporter.
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